Metode 1: Metode Ekstraksi (Metode yang saat ini digunakan di negara saya; metode ini menghasilkan kemurnian yang lebih rendah namun menawarkan biaya produksi yang lebih rendah.)
Ekstraksi Larutan Oksitosin: Ambil 100 g bubuk hipofisis posterior kering dan 30 g bubuk kuarsa, masukkan ke dalam ball mill, dan tambahkan air suling. Lakukan ekstraksi empat kali menggunakan prosedur yang sama. Volume air suling yang ditambahkan untuk setiap langkah adalah sebagai berikut: 1,4 L untuk dua ekstraksi pertama, dan 1,3 L untuk dua ekstraksi berikutnya. Setiap ekstraksi dilakukan selama 45 menit, dilanjutkan dengan sentrifugasi untuk mengumpulkan cairan; residu yang tersisa kemudian dilakukan ekstraksi lebih lanjut. Keempat ekstrak yang dihasilkan digabungkan untuk menghasilkan larutan oksitosin. Ringkasnya: Bubuk Hipofisis Posterior Kering [Air, Ball Mill] → Ekstrak Oksitosin → Pemisahan Kromatografi.
Ambil 1.500 g zeolit sintetik yang sudah diolah, tambahkan 20 L larutan asam asetat 0,25%, dan setelah diaduk, tuangkan campuran ke dalam kolom penukar ion. Setelah kadar larutan asam asetat turun hingga 2–3 cm di atas permukaan lapisan zeolit, segera masukkan ekstrak oksitosin. Pertahankan laju aliran yang sesuai dan kumpulkan eluat putih keruh yang dihasilkan (fraksi ini terutama mengandung oksitosin; karena oksitosin memiliki titik isoelektrik [pI] 7,7-sedangkan vasopresin memiliki pI 10,9-vasopresin mudah membentuk ion positif dan dengan demikian teradsorpsi ke dalam kolom). Segera setelah kadar cairan ekstrak turun ke permukaan lapisan zeolit, segera tambahkan air suling dan terus kumpulkan eluat keruh hingga aliran berhenti. Sesuaikan pH eluat keruh yang dikumpulkan menjadi 3,5 menggunakan asam asetat glasial. Panaskan larutan dengan cepat dalam penangas air hingga suhu 95 derajat, pertahankan suhu ini selama 3 menit, lalu dinginkan larutan dengan cepat dan dinginkan semalaman. Ringkasnya: Ekstrak Oksitosin [HAc, Kolom Zeolit Sintetis] → Eluat Keruh [HAc, Pemanasan] → Larutan Terpisah → Adsorpsi & Elusi. Keesokan harinya, saring larutan yang didinginkan. Ke dalam filtrat, tambahkan 10% bubur bentonit sambil diaduk (tambahkan 3 mL bubur per 100 mL filtrat). Lanjutkan pengadukan selama 1 jam untuk memudahkan adsorpsi, lalu sentrifugasi campuran. Uji cairan supernatan menggunakan larutan reagen asam sulfosalisilat; tidak adanya endapan menunjukkan bahwa proses adsorpsi telah selesai. Jika adsorpsi tidak sempurna, ulangi proses pengolahan bentonit; selanjutnya, gabungkan endapan bentonit yang diperoleh dari kedua tahap adsorpsi. Bentonit dielusi empat kali menggunakan asam asetat 1% (dengan volume masing-masing 1,6 L, 1,4 L, 1,2 L, dan 0,8 L). Untuk setiap eluat, *tert*-butiltriklorida ditambahkan setelah larutan dipanaskan hingga 80 derajat; suhu kemudian dinaikkan hingga 95 derajat, didinginkan dengan cepat hingga 25 derajat, dan disaring atau disentrifugasi. Keempat filtrat yang dihasilkan digabungkan untuk menentukan potensi dan batas vasopresin. Alur prosesnya adalah sebagai berikut: Larutan Pendingin [Filtrasi] → Filtrat [Bubur Bentonit] → Adsorbat [1% HAc] → Eluat. Persiapan Injeksi Oksitosin:
Larutan oksitosin yang telah diuji, setelah memenuhi baku mutu, diencerkan hingga konsentrasi 5 U/mL atau 10 U/mL. Kemudian disaring melalui corong kaca sinter No. 4 atau No. 5, diisi ke dalam ampul, dan disterilkan menggunakan uap yang mengalir pada suhu 100 derajat selama 30 menit untuk menghasilkan produk akhir. Alur prosesnya adalah sebagai berikut: Larutan Oksitosin (Disetujui Uji) [Filtrasi, Pengisian, Sterilisasi] → Injeksi Oksitosin.
Regenerasi Zeolit Sintetis: Zeolit sintetis dicuci dua kali dengan air suling. Kemudian, 1,5 L air (dihitung berdasarkan 500 g zeolit) dan 150 g natrium klorida ditambahkan, dan campuran diaduk selama 2 jam untuk menghilangkan dan menghilangkan vasopresin. Zeolit kemudian dicuci dengan air suling sampai tidak ada ion klorida yang tersisa. Air ditambahkan secukupnya, dan pH diatur hingga 9 menggunakan natrium hidroksida; campuran diaduk selama 30 menit, setelah itu supernatan dituang. Zeolit dicuci dengan air suling, pH diatur menjadi 5,5–6 menggunakan asam sulfat, dan dicuci kembali dengan air hingga mendekati netral. Kemudian disaring untuk menghilangkan kelebihan air dan dikeringkan pada suhu 105 derajat untuk digunakan di masa mendatang. Sebelum digunakan, ditambahkan air secukupnya, dan pH diatur menggunakan asam asetat glasial sambil diaduk agar terendam. Pembuatan Bubur Bentonit 10%: Bentonit dan air dicampur dengan perbandingan massa-terhadap-volume 1:10. Campuran digiling selama kurang lebih 1 jam, selama waktu tersebut asam asetat ditambahkan untuk menjaga kestabilan pH 3,5. Bubur yang dihasilkan kemudian disimpan dalam lemari es untuk digunakan di kemudian hari. Metode 2: Sintesis Kimia. Pertama, heptapeptida amide (segmen 3–9) disintesis mulai dari benziloksikarbonil-leusin *p*-nitrofenil ester; selanjutnya, benzyloxycarbonyl-S-benzylcysteine-tyrosine azide (segmen 1–2) disintesis; dan pada langkah ketiga, oksitosin disintesis.